Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展平稳的过程中逐渐扩展

从第一次显现呼吸道自身HIV到显现1改进型肝炎病理征状的成效数万人在成年人时期就有很好的揭示，多个呼吸道自身HIV特征性的成年人中会有70%在血清转换后10年内中风肝炎，而随访15年的成年人这一比例减小到84%。相对于之下，占病理1改进型肝炎一半以上的改进型1改进型肝炎的确诊机制还从未获得充分的分析。

越来越多的人开始适用分期系统来定义1改进型肝炎的成效：个本体在显现多种呼吸道自身HIV时进到第1阶段性，显现血糖异常时进到第2阶段性，显现征状时进到第3阶段性。一些多发呼吸道自身HIV特征性的个本体，在1期和2期，成效较迟，并发展为确诊的1改进型肝炎。我们以前揭示了一分组在首次检验到多种呼吸道自身HIV取样后大概10年无肝炎的极迟成效者，这分组征状总人数少，但外观上非常明确。随后，我们发现呼吸道自身抗本体特异性CD8+T细胞内催化在成效较快的征状中会基本不依赖于，但在近期确诊和依然依赖于的肝炎征状中会很容易检验到。这显然暗示，与成效征状相对于，这些征状免疫催化的抑制作用增强。

早期分析暗示，尽管抑制作用性T细胞内(Treg)为数情况下，但肝炎征状依赖于一些新功能缺陷，其中会都有对IL-2的催化能力减缓。此外，肝炎征状中会的震荡CD4+T细胞内显然对抑制作用非常具抵抗性，发挥为震荡T细胞内的抑制作用增强，连续性产生的Treg和本活体产生的作用于Treg，以及抗本体经历的CD4+T细胞内中会IL-2催化增强。本分析的目的是揭示了CD4+抑制作用性T细胞内(Treg)在这群人极较快成效者中会的外观上，他们的平均成年为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

法则：BOX分析是一项以人群为基础的纵向分析，在21岁以下确诊的征状直系亲属中会检查1改进型肝炎的危险因素。我们以前揭示了依然较快成效者的外观上，他们维持多重呼吸道自身HIV特征性至少10年，但从未显现肝炎的病理征状，迟性或非透过性免疫。随后，10名继续维持无肝炎并愿意发放大量本体液取样的较快成效者纳入T和B细胞内新功能险恶分析。在迄今为止的分析中会，8名迟成效者(SP分组)，中会位成年43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的呼吸道自身HIV特征性。所有的行动者都东南面1改进型肝炎成效的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身HIV对某些抗本体的特征性催化，然而，一名征状已经东南面2期大概6年，但从未显现病理征状，一名征状被诊断为肝炎，该成年人72岁，在采集实验取样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据险恶分析中会对该NAD透过了分开分析。除去外周血单个氘细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内心法和T细胞内抑制作用试验分析NAD中会Treg的频数万人、表改进型和新功能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类确认、表征和回归)透过无统筹聚类险恶分析，分析Treg表改进型。

结果：与身心健康NAD相对于，来自迟成效本体的思绪CD4+T细胞内的统筹聚类结果显示，启动时的思绪CD4+ Treg频数万人减小，与阿托品作用于的TNFR相关蛋白(GITR)指出减小有关。一名HbA1c升高的征状与成效较快者和最简单的对照分组相对于，Treg序相同。新功能险恶分析暗示，与身心健康NAD相对于，来自较快成效本体的Treg细胞内的CD4+震荡T细胞内抑制作用明显受损。发挥为对震荡CD4+T细胞内CD25和CD134指出的抑制作用减小。

示意图1 险恶的表改进型险恶分析结果显示，CD4+Treg亚改进型在迟成效队列中会减小。由FlowSOM转化的Treg室，群聚在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据标明物指出确认出10个元簇:思绪T细胞内_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞内;HLA-DR + GITR +思绪T细胞内;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)适用9个不同Treg标明转化的10个元簇的MST。每个路由表亦然一个集群(100个集群)，非常大的元集群(10个元集群)在路由表分组周围上色。每个路由表中会的糕示意图指出单个标明的指出级别。(b)每个元聚类的热示意图，以结果显示整本体标明指出。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)转化示意图，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于之下数量级为每个metacluster装支线示意图(数量级> 0.05%)确定为HD和SP分组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞内(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞内(l)。粉红色白点亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 适用CITRUS的预测模改进型证实，Treg频数万人的减小是成效较快的图案。分级门控(a - f)和柑橘险恶分析(g-k)相对于较SP行动者和最简单的HD行动者在CD4+CD45RA−T细胞内上的不同。(a)特异性CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群本体的别具特色示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR指出透过除去，建模FlowSOM群本体。(b) HD(黑点)和SP(斑点)分组以及NADSP 606(粉红色)中会CD25+ cd127的频数万人氘心内容示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的装支线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3指出气压渐变，对角突出的簇被鉴别为SP和HD队列之间的不同。(j)装支线示意图结果显示了在SP(斑点)和HD(灰点)分组中会，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相对于之下数量级(比例)。(k)直方示意图结果显示每个簇的表改进型(粉红色)和Treg标明相对于之下指出与着重指出(浅蓝色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。着重与所有其他簇中会标明的指出有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图3 与身心健康献血者相对于，成效较快者思绪treg的GITR减小。每个思绪CD4+T细胞内元簇(思绪T细胞内_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞内;HLA-DR + GITR +思绪T细胞内;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个指出标明的转变。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的指出热示意图(sp606不都有在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中会所有HD(黄褐色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR指出串联，结果显示直方示意图(c)和氘心内容示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(粉红色)所有NAD都有，p< 0.05(浅蓝色)NADSP 606和最简单的HD不都有在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR指出，从分级门控，从所有HD(黄褐色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(粉红色)串联，结果显示直方示意图(e)和氘心内容示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图4 来自较快成效的CD4+ treg细胞内控制震荡CD4+T细胞内的能力减缓。SP分组用浅蓝色的支线和白点指出，HD分组用黑色的支线和白点指出，粉红色的支线/白点指出NADsp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内透过分选。CD4+CD25−(接收者者)被标明为CFSE, Treg按观察的比例催化物。用抗CD3 /28微珠再造细胞内，培养3同一天透过流式细胞内心法检验。(a-d)与CD4+接收者者相对于之下应的treg培养(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培养。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE抑制作用平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用平均值。适用特征性对照(启动时的响应细胞内不含treg)量度抑制作用平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差险恶分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对于较测试

示意图5 震荡CD4+T细胞内对较快成效的T细胞内再造的抑制作用非常敏感。SP分组用浅蓝色的支线和白点指出，HD分组用黑色的支线和白点指出，粉红色的支线/白点指出NADsp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内透过分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标明，treg按观察的比例催化物。用抗CD3 /28微珠再造细胞内，培养3同一天透过流式细胞内心法(CD25反染)和细胞内因子险恶分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者携手培养。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE抑制作用百分数万人(b)。(c,d) CD25抑制作用百分数万人(c)和CD134抑制作用百分数万人(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在培养出来中会的指出。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差险恶分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对于较测试

论据：我们得出的论据是，来自较快成效子的再造思绪CD4+Treg在GITR指出中会获得了扩展和丰富，务实了进一步分析Treg在1改进型肝炎风险个本体中会的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28