Diabetologia：诱导但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现肝细胞膜自身免疫球蛋白到显现1改型哮喘临床腹泻的方面率在青少年以前就有很好的所述，多个肝细胞膜自身免疫球蛋白HIV的青少年前有70%在抗体转换后10年内患上哮喘，而随访15年的青少年这一数量降低到84%。相比之下之下，占多数临床1改型哮喘一半以上的改型1改型哮喘的复发机制还从未得到充分的研究工作。

越来越多的人开始适用分期系统设计来定义1改型哮喘的方面：生殖在显现多种肝细胞膜自身免疫球蛋白时转入第1收尾，显现食欲异常时转入第2收尾，显现腹泻时转入第3收尾。一些多发肝细胞膜自身免疫球蛋白HIV的生殖，在1期和2期，方面较快，并发展为复发的1改型哮喘。我们前所述了一两组在首次验证到多种肝细胞膜自身免疫球蛋白抽样后至少10年无哮喘的变慢方面者，这两组病患伤亡人数少，但外观上十分具体。随后，我们断定肝细胞膜自身特异性特异性CD8+T细胞膜加成在方面很慢的病患前基本不依赖于，但在最近复发和近十年依赖于的哮喘病患前很容易验证到。这显然得出假设，与方面病患相比之下，这些病患自身免疫加成的调节增强。

最初研究工作得出假设，尽管调节性T细胞膜(Treg)数量较长时间，但哮喘病患依赖于一些机制缺陷，其前包含对IL-2的加成能力增大。此外，哮喘病患前的物理现象CD4+T细胞膜显然对调节更具抵抗性，发挥为物理现象T细胞膜的选择性减弱，自然现象归因于的Treg和体外归因于的游离Treg，以及特异性经历的CD4+T细胞膜前IL-2加成减弱。本研究工作的目的是所述了CD4+调节性T细胞膜(Treg)在领头极很慢方面者前的外观上，他们的为数为43岁(31-72岁)，随访等待时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群相结合的平行研究工作，在21岁以下复发的病患直系亲属前检查1改型哮喘的危险因素。我们前所述了近十年很慢方面者的外观上，他们维持多重肝细胞膜自身免疫球蛋白HIV超过10年，但从未显现哮喘的临床腹泻，慢性或非透过性自身免疫。随后，10名继续维持无哮喘并情愿提供大量血液抽样的很慢方面者划定T和B细胞膜机制分析。在目前的研究工作前，8名慢方面者(SP两组)，前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的肝细胞膜自身免疫球蛋白HIV。所有的旁观者都处于1改型哮喘方面的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞膜自身免疫球蛋白对某些特异性的HIV加成，然而，一名病患早已处于2期至少6年，但从未显现临床腹泻，一名病患被诊断为哮喘，该病人72岁，在野外实验抽样时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在研究小组前对该NADPH透过了单独指标。裂解外周血单个核加成细胞膜(PBMCs)，选用多数值流式细胞膜忍术和T细胞膜选择性试制指标NADPH前Treg的增益、表改型和机制。适用FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、举例来说和重归)透过无督导聚类分析，指标Treg表改型。

结果：与生光阴品质NADPH相比之下，来自慢方面体的无意识CD4+T细胞膜的督导聚类结果显示，应答的无意识CD4+ Treg增益降低，与组胺游离的TNFR相关蛋白(GITR)说明降低有关。一名HbA1c上升的病患与方面很慢者和意味着的准确率相比之下，Treg谱有所不同。机制分析得出假设，与生光阴品质NADPH相比之下，来自很慢方面体的Treg介导的CD4+物理现象T细胞膜选择性明显损害。发挥为对物理现象CD4+T细胞膜CD25和CD134说明的选择性降低。

平面图1 深入的表改型分析结果显示，CD4+Treg亚改型在慢方面队列前降低。由FlowSOM填充的Treg房，聚集在来自所有NADPH的光阴CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标识物说明解剖出10个元簇:无意识T细胞膜_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T细胞膜;HLA-DR + GITR +无意识T细胞膜;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)适用9个不同Treg标识填充的10个元簇的MST。每个路由代表一个战斗群(100个战斗群)，更大的元战斗群(10个元战斗群)在路由两组远处制做。每个路由前的饼平面图说明单个标识的说明分级。(b)每个元聚类的热平面图，以结果显示既有标识说明。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)填充平面图，以及FlowSOM比对的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比之下较轻元素为每个metacluster装有等分(轻元素> 0.05%)断定为HD和SP两组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T细胞膜(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T细胞膜(l)。粉红色红色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon分组符号秩核查。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 适用CITRUS的预测模改型断定，Treg增益的降低是方面很慢的标志。PG除此以外(a - f)和柑橘分析(g-k)更为SP旁观者和意味着的HD旁观者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的别具特色平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR说明透过裂解，模拟FlowSOM群体。(b) HD(白斑)和SP(杂色)两组以及NADPHSP 606(粉红色)前CD25+ cd127的增益摘要平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外邻域的装有等分;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3说明切变著色，箭头出彩的簇被比对为SP和HD队列密切关系的不同。(j)装有等分结果显示了在SP(杂色)和HD(灰点)两组前，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相比之下较轻元素(数量)。(k)直方平面图结果显示每个簇的表改型(粉色)和Treg标识相比之下较说明与历史背景说明(粉红色);上列，缓存Treg_3;下面一行，缓存Treg_4。历史背景与所有其他簇前标识的说明有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon分组符号秩核查

平面图3 与生光阴品质献血者相比之下，方面很慢者无意识treg的GITR降低。每个无意识CD4+T细胞膜元簇(无意识T细胞膜_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T细胞膜;HLA-DR + GITR +无意识T细胞膜;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个说明标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的说明热平面图(sp606不包含在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇前所有HD(棕色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR说明串联，结果显示直方平面图(c)和摘要平面图(d)。Wilcoxon分组符号秩和核查，p< 0.07(粉红色)所有NADPH包含，p< 0.05(粉红色)NADPHSP 606和意味着的HD不包含在测试前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs前GITR说明，从PG除此以外，从所有HD(棕色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)串联，结果显示直方平面图(e)和摘要平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon分组符号秩核查

平面图4 来自很慢方面的CD4+ treg细胞膜控制物理现象CD4+T细胞膜的能力增大。SP两组用粉红色的直通和红色说明，HD两组用黑色的直通和红色说明，粉红色的直通/红色说明NADPHsp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜透过分选。CD4+CD25−(应答者)被标识为CFSE, Treg按注意到的数量加成物。用抗CD3 /28微珠增殖细胞膜，培植3几天后透过流式细胞膜忍术验证。(a-d)与CD4+应答者相比之下较应的treg培植(继发性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培植。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE选择性一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性一般而言。适用HIV依此(应答的积极响应细胞膜包含treg)数值选择性一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

平面图5 物理现象CD4+T细胞膜对很慢方面的T细胞膜增殖的选择性更敏感。SP两组用粉红色的直通和红色说明，HD两组用黑色的直通和红色说明，粉红色的直通/红色说明NADPHsp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜透过分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel标识，treg按注意到的数量加成物。用抗CD3 /28微珠增殖细胞膜，培植3几天后透过流式细胞膜忍术(CD25反染)和细胞膜因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同培植。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE选择性一般而言(b)。(c,d) CD25选择性一般而言(c)和CD134选择性一般而言(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植前的说明。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

假设：我们得出的假设是，来自很慢方面子的增殖无意识CD4+Treg在GITR说明前得到了扩张和丰富，强调了进一步研究工作Treg在1改型哮喘风险生殖前的异质性的必要性。

文中来历：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28